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1、首先要用一定的限制酶切割质粒，使质粒出现一个缺口，露出黏性末端。
2、用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端。
3、将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处，首先碱基互补配对结合，两个黏性末端吻合在一起，碱基之间形成氢键。
4、再加入适量DNA连接酶，催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键，从而将相邻的脱氧核糖核酸连接起来，形成一个重组DNA分子。如人的胰岛素基因就是通过这种方法与大肠杆菌中的质粒DNA分子结合，形成重组DNA分子。